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血液基因組柱式中量提取試劑盒(1-5 ml)說明書
點擊次數:1399 更新時間:2022-01-17

  

血液基因組柱式中量提取試劑盒(1-5 ml)說明書

 

BloodGen Midi Kit

目錄號:K0541

運輸條件:室溫(15-25℃)。

保存條件:Buffer RBL  4℃,其他組分室溫(15-25℃)保存。

組分說明

 

                   Cat. No.                       K0541

                   Size                              50

                   Buffer RBL                    3×250 ml

                   Buffer GR                       25 ml

                   Buffer GL                       25 ml

                   Buffer GW1concentrate)         13 ml

                   Buffer GW2concentrate)         15 ml

                   Buffer GE                       15 ml

                   Proteinase K                    50 mg

                   Proteinase K Storage Buffer      5 ml

                   Spin Column DL                    50

                   Collection Tube                   50

 

 

              本產品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途  

 

 

產品簡介

 

  本試劑盒適用于從新鮮或冷凍全血(用檸檬酸鹽、EDTA或肝素等抗凝劑處理過的

血液樣品)、血漿、血清、血沉棕黃層、骨髓、無細胞體液等樣本中提取總DNA,包

括基因組DNA,線粒體DNA及病毒DNA。本品可以處理1-5 ml的全血,可純化獲得大小

100 bp50 kbDNA,純化的DNA產量高、質量好,最大限度去除蛋白、色素、脂

類及其他抑制性雜質污染,可直接用于 PCR、熒光定量PCR、酶切和Southern  Blot

實驗。

 

產品特點

 

·柱式提取方法,適用于處理1-5 ml的血液基因組提取。

 

自備試劑:無水乙醇。

 

實驗前準備及重要注意事項

 

1.向Proteinase K中加入5 ml  Proteinase K Storage  Buffer使其溶解,-20℃保存。配

   制好的Proteinase K勿長時間室溫放置,避免反復凍融,以免影響其活性。

2.樣品應避免反復凍融,否則會導致提取的DNA的片段較小且提取量下降。

3.本試劑盒最多可以提取1-5 ml全血樣品,如需提取大量血液樣本請選用血液基因組大

   量提取試劑盒(#K0544)。

4.第--次使用前應按試劑瓶標簽說明先在Buffer GW1Buffer GW2中加入無水乙醇。

5.使用前請檢查Buffer GL是否出現結晶或者沉淀,如有結晶或者沉淀,請置于56℃水

   浴重新溶解。

6.如下游實驗對RNA污染較敏感,可加入4 μl DNase FreeRNase A100 mg/ml),

   RNase A本試劑盒并未提供,如需要可單獨向本公司訂購,貨號:K0601

7.試劑盒中的Buffer RBL渾濁后不能繼續使用。

 

 

操作步驟

 

1.向離心管(自備)中加入1-5 ml血液樣品,加入3倍體積的Buffer RBL輕輕渦旋或顛

   倒混勻。

 

23000 rpm離心10分鐘,小心吸棄上清。

3.向沉淀中加入400 μl Buffer GR,重懸沉淀。

 

   注意:如果下游試驗對RNA敏感,可加入4 μl  RNaseA100mg/ml)溶液,震蕩15秒,室溫放置5分鐘。

 

41-2ml血液樣本提取時,向以上溶液中加入40 μl  Proteinase K,混勻;2-5ml血液樣

   本提取時,向以上溶液中加入100 μl Proteinase K,混勻。

5.加入400 μl Buffer GL,顛倒混勻15次,劇烈渦旋震蕩至少1分鐘。

 

   注意:不要直接將Proteinase K直接加入到Buffer GL

 

670℃孵育10分鐘,其間顛倒混勻數次。

 

   注意:1)如溶液未*清亮,補加適量Proteinase K,孵育。延長孵育時間至溶液*清亮為止。

 

   2)孵育10分鐘DNA的產量已經達到最大,繼續延長孵育時間對DNA產量和純度沒有影響。

7.加入400 μl無水乙醇,顛倒混勻10次。短暫離心,使管壁和管蓋上液體集中到管底。

8.將上步所得到的溶液全部加入到已裝入收集管( Collection Tube)的吸附柱(Spin

   Column DL)中,若一次不能加完溶液,可分多次轉入。10,000 rpm(~8,000 x g

   離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

9.向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1(使用前檢查是否加入無水乙醇),10,000 rpm

   離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

 

   注意:如果提取樣品是小鼠或猴子等血紅素難以除去的種屬的血液基因組,建議重復步驟9

10.向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2(使用前檢查是否加入無水乙醇),10,000 rpm

離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

 

   注意:如需進一步提高DNA純度,可重復步驟10

 

11.10,000 rpm離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫數分鐘,以*晾干。

 

   注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除,乙醇的殘留會影響后續的酶促反應(酶切、PCR等)。

 

 

     12.將吸附柱置于一個新的離心管中,向吸附柱中間部位懸空加入50-200 μl Buffer GE

或滅菌水,室溫下放置2-5分鐘,10,000 rpm離心1分鐘,收集DNA溶液,-20℃保存DNA

 

         注意:1)如果下游實驗對pH值或EDTA敏感,可以用滅菌水洗脫。洗脫液的pH值對洗脫效率有很大影響,若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH將水的pH值調到此范圍),pH值低于7.0時洗脫效率不高。

 

2)離心之前室溫孵育5分鐘可以增加產量。

 

3)用另外的50-200 μl Buffer GE或滅菌水再次洗脫可以增加產量。

 

4)如果要提高DNA的終濃度,可以將步驟12所得的DNA洗脫液重新加至吸附膜上,10,000 rpm離心1min;若洗脫體積小于200 μl,可以增加DNA的終濃度,但可能會減少總產量。如果DNA的量小于1 μg,推薦用50 μl Buffer GE或滅菌水洗脫。

 

5)因為保存在水中的DNA會受到酸性水解作用的影響,如需長期保存,推薦用Buffer GE洗脫并于-20℃保存。

 

     相關產品信息

 

目錄號           產品名稱

 

K0688        Es Taq DNA polymerase (with Mg   2+)

 

K2362        Es Taq DNA polymerase (with Mg   2+, 2.5mM dNTP)

K0690        2×Es Taq Master Mix (含染料)

 

K0655        2×GoldStar Best Master Mix (含染料)

K0957        UltraSYBR Mixture

 

K0659        UltraSYBR一步法熒光定量  PCR試劑盒

K0660        UltraSYBR一步法熒光定量  PCR試劑盒  (With ROX)

 

K0953        GoldStar Taqman Mixture (With ROX)

 

 

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